克伦特罗检测试剂盒的样本前处理步骤：

　　一、样本处理前须知

　　（a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

　　（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

　　u 样本前处理需配制：

　　配液 1  0.1M HCl 溶液取 0.86ml 浓 HCl 加水定溶至 100ml。

　　配液 2  0.1M NaOH 溶液称取 0.4g NaOH 加水定溶至 100ml。

　　配液 3  乙腈-0.1M HCl 溶液V 乙腈：VHCl =84：16。

　　二、样本处理：

　　（a）尿样本的处理方法

　　取 20?l 清亮尿样直接测定（如果尿样浑浊一定要过滤或 4000r/min 离心 10min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。 3、 在 ELISA 分析中的再现性，很大程度上取决于样本稀释倍数:  1 倍 洗板的*性，正确的洗板操作是 ELISA 测定

　　（b）组织样本的处理方法一 程序中的要点。

　　1、称 2±0.05g 均质后的组织至 50ml 离心管中，加 4、 所有恒温孵育过程，避免光线照射，用盖板膜入 6ml 去离子水，充分振荡 2min，室温 盖住微孔板。

　　4000r/min 以上离心 10min(注：若组织样本中油 u  操作步骤：

　　脂含量较高，可在振荡后放入 85℃水浴 10min 1、从 2～8℃冷藏环境中取出所需试剂，室温（20～后再离心)； 25℃）平衡 30min 以上，注意每种液体试剂使

　　2、取 20?l 上层液进行分析。 用前均须摇匀。

　　样本稀释倍数:  4 倍 2、取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放

　　（c）组织样本的处理方法二 入自封袋，保存于 2～8℃。

　　1、称取 2 ± 0.05g 均质后的组织于 50ml 离心管 3、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每中，加入 6ml 乙腈-0.1MHCl，振荡 2min,室温 个样本和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和

　　4000r/min 以上离心 10min； 样本孔所在的位置。

　　2、取上清 3ml，加入 2ml 0.1M NaOH，加入 6ml 4、加标准品/样本 20?l/孔到各自的微孔中，然后加乙酸乙酯，振荡 1min，室温 4000r/min 以上离 酶标记物 50?l/孔，再加入 80?l/孔的抗体工作心 10min。取全部上清于 50～60℃氮气流或空 液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，25℃环境气流吹干； 反应 30min。

　　3、加入 1ml 去离子水溶解干燥后的残留物，混合 5、将孔内液体甩干，用去离子水 250?l/孔洗板 4～30s； 5 次，每次间隔 15～30 秒，用吸水纸拍干（拍

　　4、取 20 ?l 用于分析。 干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

　　样本稀释倍数： 1 倍 6、显色：加入底物 A 液 50?l/孔，再加入底物 B

　　（d）饲料处理方法 液 50?l/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显

　　1、称1.0±0.05g 研碎的饲料样品于50ml 离心管中， 色 15min。

　　加入 10ml 甲醇，再加入 5g 无水硫酸钠，充分 7、测定：加入终止液 50?l/孔，轻轻振荡混匀，设振荡 2min；15℃ 4000r/min 以上离心 10min； 定酶标仪于 450nm 处（建议用双波长 450/630n

　　2、吸出离心后的上清液 1ml，于 50～60℃氮气流 m 检测，5min 内读数），测定每孔 OD 值。或空气流吹干，用 1 ml 去离子水溶解干燥后的 七、结果判定残留物，再加入 1ml 正己烷混合 30s ；15℃ 结果判定有两种方法，粗略判定可用第 1 种方4000r/min 以上离心 5min；去除上层有机相；

　　法，定量判定用第 2 种方法。注意样本吸光度值与

　　3、取下层 20 ?l 用于分析。

　　其所含克伦特罗量成负相关。

　　样本稀释倍数：10 1、粗略判定。