人疟疾酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用

目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关

液体样本中疟疾。

实验原理：

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中人疟疾。用纯化的疟疾抗体包

被微孔板，制成固相抗体，可与样品中疟疾相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后

再与  HRP标记的疟疾抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物

TMB显色。TMB在    HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用

酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），与   CUTOFF值相比较，从而判定标本中疟疾

的存在与否。

操作步骤：

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2孔、阳性对照  2孔、空白对照   1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照   50μl。然后在待测样品孔先

加样品稀释液  40μl，然后再加待测样品  10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将 30（48T的  20倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至  600ml后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此

重复 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟

10.终止：每孔加终止液    50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止

液后 15分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品 OD值<临界值（CUT    OFF）者为人疟疾阴性

阳性判定：样品 OD值≥临界值（CUT    OFF）者为人疟疾阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为  630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M的硫酸，使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月