DH5α感受态细胞说明书

   DH5α Competent Cell

   目录号：B0808

   保存条件：-80℃保存。

   组分说明

                      Cat. No.                         B0808B

                      Size                             10×100  μl

                      DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                      Control DNA pUC19，0.1    ng/μl      10 μl

   产品简介

    本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA

的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载

体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选 recA1和endA1的突变

有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测，转化效率可

达108，适用于的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

注意事项

 1．感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在 -80℃下保存，不可反复冻融和放

    置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

    2．转化所有步骤均在无菌条件下操作。

    3．包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

    操作步骤

 1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。

以下实验以50μl感受态细胞为例。

 2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量

    的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

 3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

 4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

 注意：1）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

   2）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

   3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

实验代做服务：