微量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒说明书

MicroGel Extraction Kit

目录号：  K0524

保   存：  室温

组分说明

                                          Cat.No.                   K0524

                                          KitSize                     50

                                         BufferPG                     50ml

                                         BufferPS                     15ml

                                BufferPW（concentrate）               10ml

                                         BufferEB                     10ml

                                     SpinColumnDS                    50

                                 CollectionTube（2ml）               50

产品简介

   本试剂盒于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA+#片段，溶胶速度快，并利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积（可少至 10 μl），从琼脂糖凝胶中，快速纯化 50bp-50kb 的 DNA+#片段，纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而可获得高纯度、高浓度，完整性好的 DNA，回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。

注意事项

1． *次使用前应按照试剂瓶标签的说明在 BufferPW 中加入无水乙醇。

2．使用前请检查 BufferPG 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在 37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

3．电泳时使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

4．切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。

5．回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关。

6．所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

自备：无水乙醇，异丙醇，离心管  

操作步骤

1． 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管（自备）中，称取重量。

    注意：若胶块的体积过大，可将胶块切成碎块。

2． 向胶块中加入3倍体积Buffer PG；当琼脂糖凝胶浓度>2%时，建议使用6倍体积Buffer PG（如凝胶重为100mg，其体积可视为100μl，依此类推）。

3． 50℃孵育10分钟，其间不断温和地上下颠倒离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可再补加一些BufferPG或继续放置几分钟，直至胶块*溶解。

   注意：在胶充分溶解后检测 pH 值，若 pH 值大于 7.5，可向含有 DNA 的胶溶液中加 10-30 μl 的 3 M 醋酸钠（pH 5.0）将 pH 值调到 5-7。

4． 加入1倍胶体积异丙醇，上下颠倒混匀（如凝胶为100mg,则加入100μl异丙醇）。

5． 柱平衡：向已装入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200 μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6． 将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

   注意：吸附柱容积为700 μl，若样品体积大于700 μl可分批加入。

7． 吸附柱中加入500 μl Buffer PG，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

8． 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

    注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5分钟再离心。

9．12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干。

   注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的乙醇。

10．将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加10 μl Buffer EB（pH8.5），室温放置2分钟。12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

    注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。

          2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤10。

          3）洗脱体积不应小于10 μl，体积过少会影响回收效率。

         4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

         5）回收大于10 kb的DNA+#片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

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