口蹄疫病毒O型（FMDV-O）竞争ELISA抗体检测试剂盒说明书

【产品名称】

中文名称：口蹄疫病毒O型（FMDV-O）竞争ELISA（C-ELISA）抗体检测试剂盒

英文名称：Competitive ELISA Kit for Detecting Antibody of Foot and Mouth Disease Virus type O

【简介】

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的急性、热性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，一旦发病，将会引起严重的经济损失。FMDV属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，目前已知共有7中血清型，即O型、A型、C型、SAT1、SAT2、SAT3和亚洲1型。

FMDV感染或免疫后，产生抗体的主要中和表位在VP1蛋白，本试剂盒基于VP1蛋白，采用竞争酶联免疫吸附试验(C-ELISA)，配备全套诊断试剂和材料，可用于检测猪、牛、羊等动物血清或血浆中的O型口蹄疫病毒(FMDV-O)抗体，适用于动物疫苗免疫抗体的定性检测及动物群体抗FMDV-O感染风险能力的评估。试剂盒具有敏感性高、特异性强、稳定性好、操作简便快捷的特点。

【检测原理】

本试剂盒采用竞争ELISA法，在酶标板上预先包被FMDV-O VP1重组蛋白作抗原，以针对VP1蛋白的表位型特异单抗作中和竞争抗体（即酶标记物）。实验时，加入待检血清和单抗酶标记物，则待检血清种等FMDV-O特异性抗体与酶标记物竞争结合包被在酶标板上的FMDV-O VP1重组蛋白。通过洗涤除去未结合的抗体和其他成分，加入底物显色。用酶标仪450nm波长测定反应物的OD值，判定实验结果。

【试剂盒组分】

【样本要求】

尽量使用新鲜采集的血清样品；不能用于检测严重污染或严重溶血的样品；如果血清样本浑浊，需离心后取上清进行检测；检测样品可在2~8℃保存5天，长时间保存需要转移至-20℃或更低温环境中。

【实验准备】

1．试剂盒组分回温平衡：试剂盒所有组分在使用前取出，置恒温箱（25±3℃）中至少30 min，恢复至室温。

2．配制洗涤液：将试剂盒提供的浓缩洗涤液用去离子水稀释10倍（如：10 mL 10×浓缩洗涤液＋90 mL去离子水）。

【操作方法】

1．加样：按照“微孔板加样位置示例图"向抗原包被板样品孔内预先加入40 µL样本稀释液，在对照孔内分别加入50 µL阴性对照血清(NC)和50 µL阳性对照血清(PC)。然后在样品孔中加入10 µL待检血清，样品稀释比例为1:5。

微孔板加样位置示例图

2．加酶：每孔加入50 μL酶标记物，轻轻混匀。样品稀释变为1:10，即反应体系为100 µL/孔。

3．温育：轻轻振荡混匀（勿溢出），盖上封板膜，37℃孵育30 min。。

4．洗板：弃去孔中液体，每孔加300 μL洗涤液，洗涤3次，最后一次洗涤后将酶标板在吸水纸上轻轻拍干，严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。

5．显色：每孔加入100 μL显色剂，轻轻混匀，盖上封板膜，37℃避光孵育10 min。

6．终止：每孔加入50 μL终止液，振荡10秒，充分混匀，终止后即读数。

7．读数：使用酶标仪测定450 nm波长处的光密度值（OD值）。

【结果判定】

1．实验成立条件：阴性对照平均OD值＞0.6，阳性对照平均OD值＜0.4。

2．计算方法：OD_NC均值＝(OD_NC1＋OD_NC2)/2

3．样品S/N值计算公式：S/N＝样本OD值/ OD_NC均值

4．判定标准：S/N≤0.5，判为阳性；S/N＞0.5，判为阴性。

【注意事项】

1．储存条件为2~8℃。试剂盒开启前应确认其批号及有效期。

2．过期产品请勿使用，不同批号的试剂盒组分禁止混用。

3．试剂盒使用前各组分试剂均须恢复至室温（25±3℃），使用后放置2~8℃保存。

4．应注意避免向试剂盒中引入污染。移液器吸头必须一次一换。

5．实验所用仪器（如：微量移液器、恒湿培养箱、ELISA洗板机、酶标仪）需要在使用前进行功能检查，确保其可用性、准确性。

6．所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。

7．未用的微孔板条可装入密封袋中2~8℃保存。

8．试剂盒中各组分容器只针对该组分使用，不可二次利用。

【储存条件及有效期】

2～8℃保存，有效期12个月。

【规格】96T×2/盒

【生产日期及批号】

详见包装袋和外包装盒。

仅供兽医诊断使用

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