规格：100 管/48 样

土壤脱氢酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

土壤脱氢酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤体系内活性微生物量以及其对 有机物的降解活性，可以作为土壤微生物的降解性能指标。

测定原理：

氢受体 2, 3, 5 -  氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在细胞呼 吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF)，TF  呈现红色，在波 长 485nm 处有最大吸收峰，采用分光光度法于 485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品：

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比 色皿/96  孔板、冰、蒸馏水、丙酮 (不允许快递，请用户自备)。

试剂的组成和配制：

试剂一：粉剂×1  瓶，使用前加 5mL  水溶解，4℃避光保存 (尽量现配现用)。 试剂二：液体 20mL×1  瓶，4℃保存。

试剂三：丙酮， 自备。

样品处理：

1.  土壤样品：准确称取过 40  目筛的新鲜土壤样品约 0. 1g(以保证 TTC 与土壤颗粒充分接触)。

2.  污泥样品：污泥用蒸馏水洗涤，10000g ，25℃ ，离心 10min ，弃上清，反复 3-4 次。 测定步骤和操作表：

1 、分光光度计/酶标仪预热 0min ，调节波长至 485nm。

2 、操作表

对照管测定管

样品 (g)0.050.05

试剂一 (mL)0.1

试剂二 (mL)0.20.1

置于 EP  管中，充分混匀，37℃ ，暗培养 6h ，取出后立即冰浴 5min

试剂三 (mL)0.10.1

反复震荡数次，37℃保温 10min ，10000g ，4℃ ，离心 5min ，取 200μL  上清于微量石英比色 皿/96  孔板，对照管调零，测定 A 485  。

脱氢酶活力计算：

酶活单位定义：

在 37℃时，每克样品每小时使反应体系 OD  值每增加 0.01 为一个酶活单位。 计算公式：脱氢酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T ：培养时间，h；W：样品质量，g

注意事项：

1.  配制好的试剂一避光保存于 4℃ ，最好在一周内使用，若出现红色，则不能使用。

2.  试剂三易挥发，有毒，为了您的健康，请穿实验服，戴口罩，戴乳胶手套操作。

3.  反应完成后立即冰浴以终止反应，并去除干净残留的反应液。

4.  如果测定出来的吸光值较大，减少样品用量再进行测定。

5.  试剂盒 2-8℃保存。

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