TRIzon总RNA提取试剂说明书

TRIzon Reagent

目录号：K0580

保存条件：2-8℃避光保存。

组分说明

                 Cat. No.                  K0580        K0580A

                 TRIzon Reagent        20 ml        100 ml

              本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　TRIzon是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本

试剂适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提

取总RNA。样品在TRIzon中被充分裂解的同时能够最大限度地保证 RNA的完整性。在

加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA

分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总

RNA完整性好，无蛋白和 DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如 RT-PCR、

Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。

实验前准备及重要注意事项

1．预防RNase污染，应注意以下几方面：

   1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

   2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸

   泡10分钟，用水*冲洗后高压灭菌。

   3）配制溶液应使用无RNase的水。

   4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2．提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。

3．本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中

   毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、

   眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

4．样品用TRIzon 匀浆后，如不即刻加入氯仿，置于-70℃下可放置一个月以上。

5．保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。

   RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，

   Northern Blot等。

6．若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase  I（货号：YJ2090A）对

   RNA进行处理。

自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水（新开封或提取RNA专用）。

操作步骤

1．各种材料的处理

   1a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon

   中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1 ml TRIzon，混匀。

   注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。

   1b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50 mg组织加入1 ml

   TRIzon，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1 ml混匀。

   注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。

   1c.单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量TRIzon（每10 cm²面积

   需要1 ml TRIzon），用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入TRIzon 1 ml混匀。

   注意：1）收集细胞数量不要超过1×10⁷。

         2）TRNzol加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRIzon加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。

   3）收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不*，造成RNA的产量降低。

   1d.细胞悬液：离心收集细胞。每5×10⁶   -1×10⁷动物、植物和酵母细胞或每10⁷细菌

   注意：细胞加入1）加入1 mlTRIzon TRIzon前不要洗。 涤细胞，以免RNA降解。

   2）一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。

1e.血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRIzon（推荐0.25 ml全血加入0.75 ml

   TRIzon），充分振荡混匀。

   1f.可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组

   织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12,000 rpm（~13,400×g）离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

2．样品中加入TRIzon后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置 5分钟，使蛋白核

   酸复合物*分离。

3．向以上溶液中加入氯仿，每使用1 ml TRIzon加入0.2 ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡

   15秒，室温放置2-3分钟。

4．4℃ 12,000  rpm离心15分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色

   水相，RNA 主要在水相中，把水相（约600 μl）转移到一个新的RNase-Free离心管

   （自备）中。

    5．在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置10分钟。

    6．4℃ 12,000 rpm离心10分钟，弃上清。

    7．加入75%乙醇（用无RNase的水配制）洗涤沉淀。每使用1 ml TRIzon用1 ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。

    8．4℃ 12,000 rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。

       注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

    9．室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100 μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA   保存在-70℃，防止降解。

       注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

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