复杂植物总RNA提取试剂说明书

RNApurePlantPlusReagent

复杂植物总RNA提取试剂



Cat.No.  K0537 

保存：    2-8℃

组分说明

Cat.No.                     K0537        K0537A

复杂植物总RNA 提取试剂    16ml        80ml

产品简介

     本试剂可从植物组织、特别是富含多酚或淀粉的植物组织（如甘蔗、马铃薯块茎、松针、苹果、香蕉、山药等）中，提取总 RNA，操作方便、快捷。每 100ml（加入β-巯基乙醇后的终体积）可处理 100mg 组织 200 次，处理 5g 组织 4次。由本试剂提取的 RNA 纯度高，可直接应用于下游实验，如 cDNA 合成、RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、

DotBlot、体外翻译等。

注意事项

1.  预防RNase污染，应注意以下几方面：

    1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

    2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分钟，用水*冲洗后高压灭菌。

    3）配制溶液应使用无RNase的水。

    4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2.  提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。

3.  复杂植物总RNA提取试剂在使用前请加入β-巯基乙醇，将β-巯基乙醇与复杂植物总RNA提取试剂以1:4的体积混合，加 入β-巯基乙醇后的复杂植物总RNA提取试剂可在4℃保存1个月。

4.  本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

5.  保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比较短，容易降解，

    建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成 cDNA，NorthernBlot 等。

6.  若下游实验对 DNA 非常敏感，建议用不含 RNase 的 DNaseI（货号：YJ2090）对 RNA 进行处理。

自备试剂：β-巯基乙醇、5MNaCl、氯仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水

操作步骤

小量样本提取步骤：

1.   取不多于100mg的新鲜植物组织在液氮中充分研磨，将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中。

2.   加入500 μl 复杂植物总RNA抽提试剂（使用前检查是否加入β-巯基乙醇，β-巯基乙醇与复杂植物总RNA提取试剂以1:4的体积混合），反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物*分离。

3.   4℃ 12,000rpm离心1分钟，将上清转移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。

4.   在得到的水相溶液中加入100μl5MNaCl，混匀。

5.   加入300μl 氯仿，上下颠倒充分混匀。

6.   4℃ 12,000rpm离心10分钟，将上清转移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。注意：若提取的植物组织中富含多糖多酚，可重复步骤5、6一次。

7.   加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置10分钟。

8.   4℃ 12,000rpm离心10分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。

9.   加入1ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。

     注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

10.  室温放置2-3分钟，晾干。加入30-50μl 无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

     注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

大量样本提取步骤：

1.   取1g的新鲜植物组织在液氮中充分研磨，将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中。

2.   加入5ml 复杂植物总RNA抽提试剂（使用前检查是否加入β-巯基乙醇，β-巯基乙醇与复杂植物总RNA提取试剂以1:4的体积混合），反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物*分离。

3.   4℃ 10,000rpm离心1分钟，将上清转移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。

4.   每10ml 上清水相溶液中加入2ml5MNaCl，混匀。

5.   每10ml 上清水相溶液中加入6ml 氯仿，上下颠倒混匀。

6.   4℃ 10,000rpm离心15分钟，将上清转移到一个新的RNase-Free离心管（自备）中。

    注意：若提取的植物组织中富含多糖多酚，可重复步骤5、6一次。

7.   加入0.9倍体积的异丙醇，混匀，室温放置10分钟。

8.   4℃ 10,000rpm离心15分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。

9.   加入5-10ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm离心5分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。

注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

10.  室温放置2-3分钟，晾干。加入200μl 无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

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