通用型基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）

版号：TQ 201909001

【产品概述】

本试剂盒采用可以特异性结合DNA 的离心吸附柱和*的缓冲液系统，用于提取血液、唾液、口腔拭子、动物组织、粪便、饲料中的基因组DNA。可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、荧光定量PCR，文库构建、Southern 杂交等实验。

【试剂盒组成】

【适用范围】 血液、唾液、口腔或环境拭子、动物组织、粪便、饲料等样品。

【注意事项】

请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA/RNA片段较小且提取量也下降。

2.若无特别说明，所有离心步骤均在室温完成。

【操作步骤】

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1  样本前处理

1.1 血液

a. 取200 μl新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，

b. 加入20 μl Proteinase K溶液

c. 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

d. 加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

1.2 组织

a. 切取30-50 mg 动物组织样品，加入准备好的 2.0ml 离心管，样品应尽量破碎，便于后续消化；

b. 加入20 μl Proteinase K溶液和200 μl缓冲液GA ，涡旋振荡混匀，于恒温水浴锅 65 ℃水浴30 min，期间每隔 3-5 min 涡旋混匀或者置于水浴振荡仪中消化（如组织块未消化*，应延长水浴时间至组织块消失），简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。

c. 加入200 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

d. 加人200 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

1.3 拭子

a. 如果是干拭子样本直接加入500 μl缓冲液GA；如果是含有唾液保存液的拭子样本，拿到样品管后混匀，12000 rpm离心3 min，去上清保留100 μl的体积，再加入500 μl缓冲液GA。

b. 加入20 μl Proteinase K溶液，涡旋10 sec混匀，65℃放置30 min，每隔10 min涡旋混匀数次。然后吸取400 μl上清进行后续实验。

c. 加入等体积400 μl缓冲液GB，65℃放置15 min，每隔5min涡旋混匀数次。

d. 加入400 μl无水乙醇，充分颠倒混匀。

1.4 唾液

a. 按照要求取出200 μl唾液样本，加入等体积200 μl缓冲液GA

b. 加入20 μl Proteinase K溶液，颠倒混匀，65℃放置30 min，每隔10 min涡旋混匀数次。

c. 加入等体积400 μl缓冲液GB，65℃放置15 min，每隔5min涡旋混匀数次。

d. 加入400 μl无水乙醇，充分颠倒混匀。

1.5 粪便

a. 称取粪便样本150 mg-300 mg 至 2.0ml 离心管，加入800 μl缓冲液GA，涡旋1min，65℃水浴10 min，期间颠倒混匀几次。

b. 水浴后12,000 rpm(约13,400×g) 离心3min，取300 μl 上清至新的2 ml 离心管中。

c. 注意：(选做) 若后续实验对 RNA 敏感，可加入RNase A 溶液去除RNA。

d. 加入20 μl Proteinase K，振荡混匀，再加入300 μl 缓冲液 GB，涡旋振荡混匀，65 ℃水浴放置15 min，期间每隔3-5 min 振荡混匀。

e. 简短离心后加入300 μl 无水乙醇，颠倒数次混匀。

*注意：加入无水乙醇后可能会出现浑浊，但不影响DNA 提取。

1.6 饲料

a. 切取30-50 mg 饲料样品，加入准备好的 2.0 ml 离心管，加入20 μl Proteinase K溶液和500 μl缓冲液GA ，涡旋振荡混匀，于恒温水浴锅 65 ℃水浴30 min，期间每隔 3-5 min 涡旋混匀或者置于水浴振荡仪中消化（如遇到比较干的饲料样本，可适当延长裂解时间）。

b. 12,000 rpm(约13,400×g) 离心3min，取300 μl 上清至新的2 ml 离心管中。

c. 加入300 μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

d. 加人300 μl 无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

2 吸附

a. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。

3 漂洗

a. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

b. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

c. 重复操作步骤b。

d. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。

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