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法氏囊抗体检测的原理及方法
更新时间:2021-04-15 点击量:2241
  法氏囊抗体检测可溶性抗原和抗体的可以在琼脂凝胶中扩散,当抗原、抗体相遇时发生特异性结合,在较适处发生沉淀,此沉淀物因颗粒较大而不扩散,形成肉眼可见的白色沉淀带。
 
  法氏囊抗体检测的材料与试剂:
 
  普通琼脂平板、打孔器、针头、加样枪、枪头、V型血凝板、玻璃板、生理盐水
 
  鸡法氏囊阳性血清、法氏囊标准抗原、待检卵黄抗体/血清
 
  法氏囊抗体检测的方法:
 
  1.琼脂板的制备:
 
  1g优质琼脂溶于含0.1%石炭酸的8%氯化钠溶液100ml。用时倒在平皿内或置于玻片上,琼脂厚度2.5~3mm。
 
  2.打孔:
 
  用打孔器在琼脂平板上打孔,中央1个孔,周围6个孔,形成梅花形图案。
 
  要求:孔径4mm,孔距3mm。
 
  3.挑出孔内琼脂。
 
  4. 封底:在火焰上缓缓加热,使孔底的琼脂略熔化封底,避免加样后液体从孔底渗漏。
 
  5.卵黄液进行倍比稀释。
 
  V型板先在一排每孔加生理盐水50μl,再在一孔加50μl的卵黄液, 反复吹吸3次后,吸50μl混和液加入第2孔,吹吸混匀,依次倍比 稀释至第4孔……较后一孔吸50μl弃去,这样1至4孔的抗体稀释倍数依次为1:2、1:4、1:8和1:16……。
 
  6.加样:
 
  在中心孔加法氏囊标准抗原约50μl。第1孔加法氏囊标准阴性血清;第2孔加法氏囊标准阳性血清。3、4、5、6孔分别加原液、1:2、1:4、1:8、1:16……的待检卵黄液。每孔以加满为度。
 
  7.加毕后,盖上平皿盖,将平皿翻过来,置湿盘中,在37℃下自由扩散24-48小时。
 
  结果判定:
 
  若待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线,则表示阳性,若不出现沉淀线,为阴性。
 
  若用于检测血清效价,则以出现沉淀线的血清较高稀释倍数表示(2n)。
 
  用于两种抗原比较时,沉淀线有多种情形,应具体分析。

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