CCK8试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
1.将处于对数生长期的各实验组细胞胰酶消化后，*培养基重悬成细胞悬液，并计数。
2.根据细胞生长快慢决定铺板细胞密度(多数为1000-2000 cell/well)，每组3-5重复，每孔100-200μl培养基。根据实验设计决定铺板数量(如需要检测5天，则铺5张96孔板)，我们以1000 cell/well，5复孔，200μl培养基，检测5天为例，各实验组需要细胞数量为1000×5×5个细胞，从计数好的细胞悬液中取出所需的细胞量和*培养基混匀，体积为200×5×5μl。
3.统一铺好后，待细胞*沉淀下来后，在显微镜下观察各实验组的细胞密度，如果密度不均匀，则固定一组，微调其他组细胞的量再次铺板(如：发现NC组细胞较多，降低细胞量再次铺板)，放入细胞培养箱中培养。
4.从铺板后开始，每孔加入10-20μl CCK-8溶液，如果每孔的培养基为100μl，则加入10μl CCK-8溶液，如果每孔的培养基为200μl，则加入20μl CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数)。用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
5.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育2小时左右就可以了。
6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度(使用酶标仪之前要提前开启10min预热)测定完成后，保存数据。
7.连续五天检测，每天保持一样的时间点加入CCK-8溶液，在培养箱内孵育时间相同。
注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
