细菌蛋白抽提试剂盒说明书

Bacterial Protein Extraction Kit

目录号：K0888

保存条件：Lysozyme、DNaseⅠ、蛋白酶抑制剂混合物-20℃保存，其他组分室温保存。

组分说明

Cat. No.     K0888    K0888A

Size         25 次     100 次

Bacterial Protein Extraction Reagent 25 ml 100 ml

蛋白酶抑制剂混合物   250 μl     1 ml

Lysozyme （50 mg/ml）   50 μl     200 μl

DNaseⅠ（1,000 U/ml）   25 μl     100 μl

产品简介

　　细菌蛋白抽提试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白及

转染昆虫细胞的蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污

染。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNase I和蛋白酶抑制剂混

合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取

的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。

注意事项

1．细菌蛋白抽提试剂适用于从新鲜或冻存细菌中提取蛋白，也适用于从杆状病毒转染

   的昆虫细胞中提取蛋白。

2．本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。

3．使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。

4．使用本产品从一系列常见的宿主菌中抽提可溶性蛋白，均有较好的提取效果。对于

   特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻细胞。

5．根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂。

                本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途

操作步骤

       ●  昆虫细胞蛋白提取

     1．低速离心收集细胞。

     2．称量细胞湿重，按10 ml/g的量加入细菌蛋白抽提试剂。

     3．重悬后，冰上孵育20分钟（冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。

     4．15,000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。

       ●  细菌可溶性蛋白提取

     1．5,000×g离心10分钟，收集菌体。

     2．可选步骤：每1 ml 细菌抽提试剂中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、2 μl Lysozyme

        （50 mg/ml）和10 μl蛋白酶抑制剂混合物，涡旋震荡混匀。

     3．按照每克菌体沉淀加入20 ml细菌蛋白抽提试剂的比例 ，即按照1:20的比例，向菌体沉淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体*重悬。

     4．重悬后，室温孵育10-15分钟（放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。

     5．15,000×g离心5分钟。

     6．转移上清至新的离心管中（上清中即为可溶性蛋白），进行蛋白定量及下游实验。

        注意：如过表达的大部分蛋白仍在沉淀中，目的蛋白可能以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液（K0007）进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。

   常见问题：

1. 目的蛋白不溶

可能原因：目的蛋白表达为包涵体

解决方法：优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液,在蛋白抽提试剂中加入Lysozyme  和  DNase I

2. 加入Lysozyme 后目的蛋白仍没有提取出来

可能原因:温度过低,Lysozyme活性降低或失活

解决方法：将使用试剂恢复至室温,加入更多的Lysozyme或更换新的酶

3. 提取物粘度高

可能原因：DNase I 活性降低或失活

解决方法：a加入更多的DNase I 或更换新的DNase I

         b将镁离子的终浓度增加至2mM

4. 蛋白抽提后仍有大部分蛋白存在于沉淀中

可能原因：蛋白量过大

解决方法：加入Lysozyme及DNase I

5. 蛋白抽提试剂有沉底析出

可能原因：温度过低

解决方法：将蛋白抽提试剂恢复至室温

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