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免疫酶标固相载体方法
更新时间:2011-06-27 点击量:1573

免疫酶技术ELISA法是一项先进的免疫化学测定技术,自20世纪60年中期问世70年代初发展以来,引起了许多学者有关技术人员的重视。这是因为免疫酶技术有其*的优点.

免疫酶标固相载体方法,根据固相载体的不同,一般分为三类,即酶联免疫吸附测定(ELISA)和*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,简称DASS)体系测定。后来又发展出纤维素薄膜作为载体的ELISA检测法,俗称Dot-ELISA.。ELISA和Dot-ELISA的差别主要是所用载体不同,由于纤维素薄膜比聚苯乙烯具有更多的优点,因此目前Dot-ELISA的使用越来越广泛。

一,固相载体

任何适用于放射免疫测定的固相载体(也称为固体相),均可用于免疫酶标固相载体的方法中。

免疫酶技术中使用的固相载体一般分为两类,一类是具有疏松结构的小球状物质,另一类是塑料平板或管。

小球状物载体

在免疫酶技术中,使用zui早的疏松的小球状物载体是微晶纤维素(Micro-crystalline Cellulose),后来逐渐使用琼脂糖珠(Sepharose 4B),形成*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,简称DASS)体系。琼脂糖珠经活化后,抗体或抗原蛋白质是通过共价键与小珠结合的,结合方式如下:

通过CNBr共价偶合的抗原或抗体形成的结合物是稳定的,但是在一系列处理过程中,操作复杂,标记酶容易失活,影响实验结果的因素较多,加之在测定过程中,分离和清洗悬浮小珠要经多次离心,步骤繁琐,因此实际应用较少。

另外,有人曾将聚丙烯酰胺凝胶(Biogel P-300)和一定孔径的玻璃珠(Controlled Poreglass)作为固相载体。

也有人用乙酰氯甲酸盐(Ethylchloroformate)和戊二醛作为聚合剂,使免疫反应物相互交联而成为固态。

Kamefusa等发现,硅碎片(Silicon Pieces)作为载体,物理吸附稳定,制作简易且价格低廉。

大多数小球状物载体很难适合于免疫酶技术的大规模检测。

 

沪公网安备 31011802001677号

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