ELISA检测e抗原的原理

免疫原性是抗原zui重要的性质，它主要取决于物质本身的性质及其与机体的相互作用。由于自然界中各种生物体都有其各自特异性的抗原，因此抗原性物质的种类繁多，根据不同的标准可以对其进行分类，分类方法也十分复杂。

E抗原是从乙肝表面抗原（HBsAg）阳性血清中发现的一种新抗原，他可能与乙型肝炎的传染性有密切关系。李羽等报道用ELISA检测e抗原的灵敏度比琼脂免疫扩散法高150—300倍。试验程序：

1.病人免疫球蛋白IgG（e抗体）的提取：用饱和硫酸铵沉淀法处理上述抗体阳性人血清所得粗提液过柱（DEAE-Cellulose）收集IgG阳性部分，再穿流正常人血清柱。得IgG（e抗体），浓缩为5ng/ml贮藏放于冰箱中。

2.酶标记IgG（e抗体）的制备：用戊二醛二步法，将10mg  HRP交联5 mg  IgG（e抗体），分装于小瓶，在低温（-20°C）下保存。

3.ELISA对e抗原的检测:

a. IgG（e抗体）包被聚苯乙烯微量反应板，在4°C过夜（IgG浓度为25r/ml）。

b.洗涤3-5次。

c.加待检病员血清（1:10稀释，每份标本加两孔，每孔0.1ml,37°c孵育2h）.

e.洗涤3-5次。

f.加酶标记IgG（e抗体），37°C孵育2h（酶标记IgG稀释度为1:640）。

g.洗涤3-5次。

h.加底物与供氢体（H2O2与OPD）,置于暗处反应30min.

i.加2mol/L硫酸终止反应。

j.每板均设阳性与阴性对照，根据不同的显色反应予以判断。

k.经过上诉方法检测初步确定为阳性的标本，取两份，一份加足量的e抗体血清，另一份加正常人血清，在37°C孵育1h，然后再按上述方法测定e抗原。加e抗原体血清者，在显色反应受到控制（与正常血清对比）时才可判断为e抗原阳性。

虽然ELISA法在理论上十分简单，但每一步都有要注意的事项。不论是新设计的ELISA还是沿用其他ELISA方法都有以下几方面技术要点：固相载体的选择和试剂的制备，反应条件和操作的标准化。