ELISA应用的一些说明：克服非特异性吸附

在ELISA中，非特异性吸附是值得注意的问题，如果抗原或抗体纯化不过关，产生非特异性吸附是实验操作中无法避免的。

但是，即使抗原抗体的纯化达到一定水平，还是有可能产生非特异性吸附。例如塑料载体表面的吸附，为了避免非特异性显色，需用含Tween20的PBS或生理盐水作为洗脱液，吐温 （Tween）就是指聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，为非离子型的表面张力物质，常作为助溶剂。根据它与聚合山梨醇所结合的脂肪酸种类不同而进行吐温编号，结合月桂酸的为吐温20，结合棕榈酸的为温40，结合硬脂酸的为吐温60，结合油酸的为吐温80。在免疫酶技术中常用含吐温20的PBS作洗涤剂或作稀释样品和酶标抗体（抗原）之用，它的洗涤效果要比牛血清蛋白溶液（0.5%）好，具有减少非特异性吸附和增强抗原抗体结合的作用。吐温20的使用量一般在0.06%-0.1%.有学者认为，Tween20还有增强特异性反应的作用。另外，检测血清和酶标记抗体用含0.5%-1%牛血清白蛋白（或0.1%白明胶）稀释也能得到增强特异性吸附的作用。样品首先用稀释的健血清孵育，也有助于去除非特异性显色。除此之外，反应的时间和掌握反应剂zui适浓度，也有助于克服非特异性吸附。反应一般需4~5h（25℃），如要减少反应时间则可升至37℃，虽然反应温度为37℃时对灵敏性和准确性稍有影响，但是减少了保温时间（需2~3h），对结果影响并不大，因此，37℃被经常采用。酶标记抗体的浓度太高，易出现假阳性；太低，则不灵敏。所用待测样品、酶标记抗体和抗抗体的zui适浓度，通过实验才能获得。在一定范围内，ELISA的反应强度与待测样品浓度的对数呈线性关系，通过一系列不同稀释度的待测样品的测定，才能得出待测样品的zui适稀释度范围。另外，由于加入固相载体进行致敏的抗原量过多，因而造成的前带（prozone）效应，也可以通过测试抗血清的稀释度而消除，因为在抗体zui适量的情况下，多余的抗原也不起干扰作用。关于酶标记抗体的zui适浓度，可以通过剂量反应曲线（一系列稀释的阳性和阴性血清，与同一浓度的酶标记抗体反应），选择同一稀释度的阳性和阴性血清分别对不同稀释度的酶标记抗体反应而确定。阳性血清的吸收值与阴性血清的吸收值之比为zui大值时，酶标记抗体的浓度为zui适浓度。