一、猪蓝耳病检测的检验原理：

　　本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的猪蓝耳病毒抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的PRRSV-Ab结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶标抗猪IgG抗体”复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与PRRSV-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。

　　二、猪蓝耳病检测的样本要求：

　　1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存应不超过一周，长期应在-20℃以下保存。

　　2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌及含叠氮钠血清样本。

　　三、猪蓝耳病检测的实验准备：

　　1．试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前，先取出置室温30min，可以获得较佳结果。.

　　2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将样本作40倍稀释，稀释的样本混合均匀能取得较好结果。

　　3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释20倍（例：将50ml洗涤液加入950ml去离子水中）。若20倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37℃至溶解后即可。

　　四、猪蓝耳病检测的检验方法：

　　1．加样：根据样本数量，取所需板条，检测时，设阴、阳性对照各2孔，分别加入不用稀释的阴、阳性对照血清100μl于相应孔中（可不设空白对照）。其余为样本孔，每孔加100μl用样本稀释液稀释好的样本（可做单孔也可双孔检验）。

　　2．温育：加样后，盖上盖板膜，置37℃温育30分钟。

　　3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，静置10s左右，直接甩出，洗涤3次，洗涤后拍干板内液体。

　　4．加酶：每孔加酶标记物100μl。

　　5．温育：加好酶标记物后盖上盖板膜，置37℃温育30分钟。

　　6．洗板：同步骤3。

　　7．显色：每孔加显色剂100μl，振荡混匀，37℃避光反应10分钟。

　　8．终止：每孔加终止液50μl，振荡10秒，充分混匀，终止后即读数。

　　9．读数：以450nm/630nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。

　　五、猪蓝耳病检测的结果判定：

　　在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.6，阴性对照孔的平均OD值必须＜0.15；样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理:

　　S/P=(样本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示阴性对照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示阳性对照孔平均OD450/630值；

　　当样本的S/P≥0.2时判为阳性；样品S/P值＜0.2时判为阴性；

　　若进行大量样本检测时，可使用试剂盒专业分析软件进行分析数据结果。